親子鑒定的實驗步驟在不同地區(qū)（如畢節(jié)）的正規(guī)機(jī)構(gòu)操作流程基本一致，核心是通過科學(xué)方法對比 DNA 遺傳標(biāo)記。以下是詳細(xì)的實驗步驟及相關(guān)說明，適用于司法、個人或胎兒親子鑒定（以常規(guī)STR 分型技術(shù)為例）：

一、畢節(jié)親子鑒定咨詢中心名單

1.畢節(jié)鼎律親子鑒定咨詢中心（點擊左下方聯(lián)系方式咨詢）

畢節(jié)親子鑒定咨詢中心地址：畢節(jié)市七星關(guān)區(qū)勝利路44號

一、樣本接收與登記

樣本驗收

實驗室接收樣本（如血液、口腔拭子、毛發(fā)等），檢查樣本類型、數(shù)量及保存狀態(tài)（如毛發(fā)是否有毛囊、血液是否凝固）。

對不合格樣本（如毛發(fā)無毛囊、牙刷混用），需通知客戶重新采樣。

編號與記錄

為樣本分配唯一編號（如 “BJ20250606-001”），關(guān)聯(lián)委托信息（姓名、聯(lián)系方式、鑒定類型等），確?？勺匪?。

司法樣本需同步核驗被鑒定人身份信息（如身份證、委托書）并拍照存檔。

二、DNA 提取

目標(biāo)：從樣本中分離出 DNA 分子，去除蛋白質(zhì)、細(xì)胞碎片等雜質(zhì)。

操作步驟：

樣本預(yù)處理

血液 / 血痕：用 Chelex-100 法或磁珠法裂解紅細(xì)胞，釋放白細(xì)胞中的細(xì)胞核 DNA。

毛發(fā) / 指甲：用蛋白酶 K 消化毛囊或角質(zhì)細(xì)胞，破壞細(xì)胞膜釋放 DNA。

口腔拭子：用生理鹽水洗脫棉簽上的口腔細(xì)胞，離心后提取 DNA。

核酸提取

硅膠膜吸附法：利用 DNA 與硅膠膜在高鹽條件下結(jié)合的特性，通過洗滌、洗脫獲取純凈 DNA。

磁珠法：磁珠表面修飾硅羥基，在裂解液中吸附 DNA，通過磁力分離雜質(zhì)。

常用方法：

提取后得到 DNA 溶液，測定濃度（如用紫外分光光度計或熒光定量儀），確保濃度≥10ng/μL，純度 OD260/OD280 在 1.8-2.0 之間。

三、PCR 擴(kuò)增

目標(biāo)：通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）特異性擴(kuò)增 DNA 中的 STR 位點，便于后續(xù)檢測。

操作步驟：

引物設(shè)計

針對國家標(biāo)準(zhǔn)的 STR 位點（如 D21S11、D7S820、CSF1PO 等 20-28 個位點）設(shè)計引物，部分試劑盒包含性別決定位點（如 Amelogenin，區(qū)分 XY 染色體）。

反應(yīng)體系配置

DNA 模板（2-5μL）

引物混合液（每個位點上下游引物）

Taq DNA 聚合酶、dNTPs（核苷酸原料）、緩沖液

去離子水補(bǔ)至總體積（通常 25-50μL）

混合以下成分：

擴(kuò)增程序

變性：94℃，30 秒

退火：55-60℃，30 秒（引物與 DNA 模板結(jié)合）

延伸：72℃，45 秒（合成新 DNA 鏈）

預(yù)變性：94℃，5 分鐘（打開 DNA 雙鏈）。

循環(huán)階段（30-35 個循環(huán)）：

終延伸：72℃，10 分鐘，確保產(chǎn)物完整。

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